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使用液相色譜柱時應(yīng)當(dāng)注意哪些事項
點擊次數(shù)：1320 發(fā)布時間：2020-08-21
使用液相色譜柱時應(yīng)當(dāng)注意哪些事項
液相色譜柱的技術(shù)主要包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù)，填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)沒有想象中那么簡單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床，需要經(jīng)驗積累。
一般情況下，正相反相柱應(yīng)該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖，不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。建議正向使用，反向沖洗。
使用該色譜柱時應(yīng)當(dāng)注意以下事項：
避免過柱壓：雖然液相色譜柱能耐受的壓力可達(dá)6000psi,但過及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命,避免的方法是：柱壓過時,盡可能采用較小的流速,以不過柱允許壓力的一半為宜。當(dāng)流速較大時,應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。使用手動進(jìn)樣閥時，進(jìn)樣閥的切換要盡可能的快。否則過20%的壓力沖擊會快使柱報廢。當(dāng)使用多柱聯(lián)用時，柱切換要避免在壓下進(jìn)行。
當(dāng)流動相中含有緩沖鹽時，則過濾是必要的，當(dāng)緩沖溶液放置一段時間(視環(huán)境溫度不同而異，夏季一般不過48h，冬季一般不過一周)后，在使用前還應(yīng)重過濾。
過濾流動相和樣品：流動相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成，經(jīng)過色譜柱的流動相均應(yīng)過濾，但在實際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別:當(dāng)有機(jī)溶劑用色譜純級，水用石英亞沸水或其它純水時，在能確保水和有機(jī)溶劑的質(zhì)量且沒有受到污染時，過濾并無更多實際意義。
需要加裝保護(hù)柱：保護(hù)柱的作用是過濾掉來自流動相和樣品的化學(xué)雜質(zhì)的同時，也可以除去流動相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口、進(jìn)樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1、2μm等不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污染，因此加裝保護(hù)柱是必要的，是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時更是保護(hù)分析柱*的措施。
